ردیابی، همسانه سازی و تعیین توالی کامل ژن پروتئین پوششی ویروس برگ بادبزنی مو از تاکستان‌های استان خراسان رضوی
کد مقاله : 1301-FIPPC (R2)
نویسندگان:
سارا قارونی کاردانی *1، محمودرضا کریمی شهری2، هاشم کمالی2، فاطمه آزاد دیسفانی2
1- استادیار پژوهش، بخش تحقیقات گیاه‌پزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان خراسان رضوی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مشهد، ایران
2بخش تحقیقات گیاه‌پزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان خراسان رضوی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مشهد، ایران
چکیده مقاله:
تاکنون 63 عامل ویروسی آلوده کننده مو، در دنیا شناسایی شده است که یکی از مخرب‌ترین آن‌ها، ویروس برگ بادبزنی مو (Grapevine fanleaf virus, GFLV) است. این ویروس یکی از شایع‌ترین ویروس‌های شناخته شده مو در سراسر دنیا است که تا 80 درصد خسارت می‌زند و موجب زوال و مرگ درختچه‌های مو، کاهش دوره ثمردهی، کاهش قدرت جوانه‌زنی قلمه‌ها و کاهش مقاومت به شرایط محیطی می‌گردد. به منظور شناسایی و تعیین پراکنش این ویروس، طی بهار و تابستان سال‏‏های 1397 و 1398 از تاکستان‌های استان خراسان رضوی در شهرستان‌های کاشمر و بردسکن نمونه‌برداری انجام شد. نمونه‌ها پس از ثبت مشخصات ظاهری به آزمایشگاه منتقل و تا زمان انجام آزمایش در 4 درجه سانتی‌گراد نگهداری شدند. استخراج آر. ان. ای از برگ‌های جوان مو، با استفاده از (Cetyl-trimethylammonium bromide) CTAB انجام شد. برای شناسایی GFLV از آغازگرهای طراحی شده (MpF/CpR) برمبنای ترادف نوکلئوتیدی ژن پروتئین پوششی جدایه‌های ایرانی ویروس برگ بادبزنی مو استفاده شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی قطعه‌ای بطول 1725 جفت باز مربوط به طول کامل پروتئین پوششی ویروس و قسمتی از انتهای'3 ژنوم تکثیر شد. محصولات RT-PCR پس از خالص سازی از ژل، به حامل pTG19-T الحاق و پلاسمیدهای نوترکیب پس از انتخاب، در هر دو جهت توالی‌یابی شدند. نتایج تعیین ترادف و مقایسه توالی‌های ژن پروتئین پوششی به دست آمده با بانک ژن نشان داد که جدایه‌های تعیین توالی شده در سطح نوکلئوتیدی 98-90 درصد با جدایه‌های موجود در بانک ژن شباهت دارند. با استفاده از نرم افزار mega7 جدایه‌های تعیین ترادف شده در این تحقیق همراه با جدایه‌های گزارش شده از کاشـمر در یک گروه قـرار گرفتند. همانند سایر جدایه‌های ایرانی ویروس برگ بادبزنی مو، این جدایه‌ها نیز در آنالیز فیلوژنی جدا از سایر جدایه‌های دنیا طبقه‌بندی شدند. در نمونه‌هایی که به روش مولکولی آلودگی آنها اثبات گردید علائم متنوعی شامل رگبرگ زردی، بدشکلی برگها، باز شدن سینوس دمبرگ، مجتمع شدن رگبرگ‌های اصلی، تولید جوانه‌های دوگانه، کوتاه شدن میانگره‌ها، انشعابات غیر‌عادی در شاخه‌ها، ریزش حبه در خوشه‌ها و عدم یکنواختی در اندازه حبه‌ها دیده شد. نتایج حاصل بیانگر گسترش وسیع این ویروس با علائم متنوع در تاکستان‌های استان خراسان رضوی می‌باشد.
کلیدواژه ها:
: پوشش پروتئینی، نپو ویروس، ویروس برگ بادبزنی مو، واکنش نسخه برداری معکوس
وضعیت : مقاله برای ارائه به صورت پوستر پذیرفته شده است